III Consenso Brasileiro para Pesquisa de Autoanticorpos em Células HEp-2: perspectiva histórica, controle de qualidade e associações clínicas / Third Brazilian Consensus for Autoantibodies Screening in HEp-2 Cells: historical perspective, quality control and clinical associations

OBJETIVO: O III Consenso Brasileiro para Pesquisa de Autoanticorpos em Células HEp-2 (FAN) objetivou discutir estratégias para controlar a qualidade do ensaio, promover a atualização das associações clínicas dos diversos padrões e avaliar as dificuldades de implantação do II Consenso ocorrido no ano de 2002. MÉTODOS: Nos dias 13 e 14 de abril de 2007 participaram do encontro em Goiânia pesquisadores e especialistas de diversos centros universitários e laboratórios clínicos de diferentes regiões do Brasil, com o propósito de discutir e aprovar as recomendações que visam a melhores padronização, interpretação e utilização do ensaio pelos clínicos. Foram convidados como ouvintes representantes comerciais de diferentes empresas produtoras de insumos para realização do teste de FAN. RESULTADOS E CONCLUSÃO: Dada a heterogeneidade de microscópios e reagentes disponíveis no mercado, o III Consenso enfatizou a necessidade do controle de qualidade em ensaios de imunofluorescência indireta. Foram também feitas algumas adequações na terminologia utilizada para classificar os diferentes padrões. Finalmente, foi realizada uma atualização das associações clínicas com finalidade de facilitar cada vez mais o melhor uso do ensaio pelos clínicos.

OBJECTIVE: The Third Brazilian Consensus for Autoantibodies Screening in HEp-2 Cells (ANA) had as purpose the evaluation of difficulties in the accomplishment of the 2nd Consensus recommendations that took place in the year of 2002, the discussion of strategies for quality control of the assay and the discussion of an update of the clinical associations of the several immunofluorescent patterns. METHODS: Several ANA experts from university centers and private laboratories in different areas in Brazil joined the workshop in Goiânia on 2007 April 13 and 14 with the purpose of discussing and approving the recommendations for standardization, interpretation and use of the test by physicians. Commercial representatives of different ANA slide brands were also invited as listeners to the workshop. RESULTS AND CONCLUSION: The 3rd ANA Consensus emphasized the need for quality control in indirect immunofluorescent assays since there is a considerable heterogeneity of available microscopes and reagents. It also promoted adaptations in the previously approved terminology used to classify the different patterns and finally updated the clinical associations of the several patterns with the purpose of providing guidance for interpretation of the assay by clinical pathologists and assistant physicians.

3º Consenso Brasileiro para pesquisa de autoanticorpos em células HEp-2 (FAN): recomendações para padronização do ensaio de pesquisa de autoanticorpos em células HEp-2, controle de qualidade e associações clínicas / Third Brazilian Consensus for autoantibodies screening in HEp-2 cells (ANA): recommendations for standardization of autoantibodies screening trial in HEp-2 cells, quality control and clinical associations

OBJETIVO: O 3º Consenso Brasileiro para pesquisa de autoanticorpos em Células HEp-2 (FAN) teve como propósito avaliar as dificuldades de implantação do 2º Consenso ocorrido no ano de 2002, discutir estratégias para controlar a qualidade do ensaio e promover a atualização das associações clínicas dos diversos padrões. MÉTODOS: Participaram do encontro em Goiânia nos dias 13 e 14 de abril de 2008 pesquisadores e especialistas de diversos centros universitários e laboratórios clínicos de diferentes regiões do Brasil, com o propósito de discutir e aprovar as recomendações que visam à melhor padronização, interpretação e utilização do ensaio pelos clínicos. Representantes comerciais de diferentes empresas produtoras de insumos para realização do teste de FAN foram convidados como ouvintes. RESULTADOS E CONCLUSÕES: O 3º Consenso enfatizou a necessidade do controle de qualidade em imunofluorescência dada a heterogeneidade de microscópios e reagentes disponíveis no mercado, promoveu adequações na terminologia utilizada para classificar os diferentes padrões e, finalmente, atualizou as associações clínicas com finalidade de facilitar cada vez mais o melhor uso do ensaio pelos clínicos.

OBJECTIVE: The Third Brazilian Consensus for autoantibodies Screening in HEp-2 cells had as purpose the evaluation of difficulties in the accomplishment of the 2nd Consensus recommendations that took place in the year of 2002, the discussion of strategies for quality control of the assay and the promotion of an update of the clinical associations of the several immunofluorescent patterns. METHODS: Several ANA experts from university centers and private laboratories in different areas in Brazil joined the workshop in Goiânia on 2008 April 13 and 14 with the purpose of discussing and approving the recommendations for standardization, interpretation and use of the test by physicians. Commercial representatives of different ANA slide brands were also invited as listeners to the workshop. RESULTS AND CONCLUSIONS: The 3rd Consensus emphasized the need for quality control in indirect immunofluorescent since there is a considerable heterogeneity of available microscopes and reagents. It also promoted adaptations in the previously approved terminology used to classify the different patterns and finally updated the clinical associations of the several patterns with the purpose of providing guidance for interpretation of the assay by clinical pathologists and assistant physicians.

Validação laboratorial de um método automatizado de dosagem da atividade de adenosina desaminase em líquido pleural e em líquido cefalorraquidiano / Laboratorial validation of an automated assay for the determination of adenosine deaminase activity in pleural fluid and cerebrospinal fluid

OBJETIVO: A incidência global de tuberculose reforça a necessidade de melhores ensaios para o diagnóstico desta doença, principalmente da tuberculose extrapulmonar. O objetivo do trabalho foi validar o desempenho de um método automatizado para a determinação da atividade de adenosina desaminase (ADA) no líquido pleural (LP) e no líquido cefalorraquidiano (LCR), comparando-o com um método convencional (Giusti modificado). MÉTODOS: Selecionaram-se 134 amostras da rotina laboratorial: 94 de LP e 40 de LCR. Foram realizadas as determinações da atividade de ADA através dos dois métodos. Calculou-se a precisão inter- e intra-ensaios, análise de regressão linear, testes de concordância simples e médias das diferenças. RESULTADOS: Os coeficientes de correlação para as amostras de LP e LCR foram, respectivamente, 0,96 e 0,95. A precisão interensaio foi determinada pela média de 21 amostras replicadas em ensaios diferentes para 3 níveis de atividade: baixa, média e alta. Os coeficientes de variação em porcentagem ( por centoCV) foram, respectivamente, 5,9, 8,1 e 5,8 para amostras de LP; e 21,9, 18,6 e 13,8 para amostras de LCR, respectivamente. A precisão intra-ensaio em por centoCV foi, respectivamente, 1,3 e 11,7 por cento para amostras de LP e LCR. A concordância entre os dois métodos em amostras de LP e LCR foi, respectivamente, 96,8 por cento e 100 por cento, considerando-se como valores de referência para o diagnóstico de TB 40 U/L (convencional) e 30 U/L (automatizado) em amostras de LP, e 9 U/L em amostras de LCR para os dois métodos. CONCLUSÕES: Os resultados validaram o método automatizado de determinação da atividade de ADA para o uso em amostras de LP e LCR como alternativa ao método convencional.

OBJECTIVE: The incidence of tuberculosis worldwide has emphasized the need for better assays designed to diagnose the disease, principally the extrapulmonary form. The objective of the present study was to validate the performance of an automated method for the determination of adenosine deaminase (ADA) activity in pleural fluid (PF) and cerebrospinal fluid (CSF), comparing it with a conventional method (the modified Giusti method). METHODS: In total, 134 samples were selected from among those tested in our laboratory: 94 PF samples and 40 CSF samples. The ADA activity was determined using the two methods. Inter- and intra-assay precision was determined, linear regression analysis was performed, simple concordance tests were conducted, and the means of the differences were calculated. RESULTS: The correlation coefficients for PF and CSF samples were, respectively, 0.96 and 0.95. Inter-assay precision was determined using 21 replicates at 3 different activity levels: low, medium and high. The percentage coefficient of variation ( percentCV) was, respectively, 5.9, 8.1 and 5.8 for PF samples, compared with 21.9, 18.6 and 13.8 for CSF samples. Intra-assay precision in percentCV was 1.3 and 11.7, respectively, for PF and CSF samples. The concordance between the methods in PF and CRF samples was, respectively, 96.8 percent and 100 percent, considering the reference values for the diagnosis of TB to be 40 U/L (conventional) and 30 U/L (automated) in PF samples, versus 9 U/L (for both methods) in CSF samples. CONCLUSIONS: The results validate the use of the automated method of determining ADA activity in PF and CSF samples as an alternative to the conventional method.

Efeitos da pentoxifilina na anemia resistente à eritropoetina em pacientes sob hemodiálise / Pentoxifylline effects on the resistant anemia to erythropoietin in hemodialysis patients

A anemia na insuficiência renal crônica deve-se à redução da produção de eritropoetina, devido à diminuição da massa renal funcionante. A eritropoetina tem sido preconizada para o tratamento da anemia, no entanto, cerca de 5 por cento dos pacientes são resistentes à mesma. A resistência à eritropoetina é definida como a necessidade do uso de uma dose maior que 12.000U/kg por semana, sem atingir o hematócrito alvo de 33 por cento a 36 por cento. As citocinas pró-inflamatórias têm uma associação importante com a anemia resistente ao tratamento com eritropoetina (EPO). A pentoxifilina tem sido usada para inibir a produção dessas citocinas pró-inflamatórias. Este estudo foi realizado com os pacientes sob hemodiálise no Instituto de Nefrologia Ribamar Vaz, do Hospital da Santa Casa de Misericórdia de Maceió-Al. Os pacientes com diagnóstico de resistência à eritropoetina receberam pentoxifilina na dose de 400 mg VO, após hemodiálise por seis meses. Avaliamos o hematócrito e a proteína C reativa (PCR) em dois momentos: ao final de três meses com 12 pacientes e, ao final de seis meses, com sete pacientes. A média de PCR dos 12 pacientes, no primeiro mês, foi de 5,65 mg/l. No terceiro mês, de 2,58 mg/l. Porém, no sexto mês, considerando apenas os sete que terminaram o projeto, foi de 4,55 mg/l. Não foi observada diferença significativa. A média final dos hematócritos(Htc) observada nos pacientes foi de 28,74 por cento. A média dos Htc na avaliação de seis meses que precederam o início do projeto, foi de 26,22 por cento. Não foi observada diferença estatisticamente significante, quer nos 12 pacientes acompanhados por três meses ou nos sete que conseguiram concluir o estudo. Não observamos correlação entre os níveis de PCR e os de hematócrito. No entanto, em nossa amostragem, a média de PCR basal não estava elevada e este pode ter sido um fator importante nos resultados díspares em relação aos dados da literatura. Sendo assim, concluímos que, em...

Anemia in end stage renal disease occurs due to the reduction in the production of erythropoietin caused by the decrease in functional renal mass. Erythropoietin has been indicated in the treatment of anemia however, about 5 percent of patients are resistant to this treatment. In erythropoietin resistance, it is necessary to increase the dosage to more than 12000 U/Kg/weekly, but even so the hematocrit target, which should remain between 33 and 36 percent, is not reached. Pro-inflammatory cytokines are significantly associated to resistance to erythropoietin treatment and so pentoxifylline is used to inhibit the production of these pro-inflammatory cytokines. This study was carried out with hemodialysis patients at the Ribamar Vaz Institute of Nephrology - in the Santa Casa de Misericórdia Hospital of Maceió. Patients with diagnoses of resistance to erythropoietin received 400mg VO pentoxifylline after hemodialysis over a period of six months. The hematocrit and C-reactive protein (CRP) concentrations were analyzed three times: in the first month, at the end of three months (12 patients) and at the end of six months (7 patients). The mean CRP of the 12 patients in the first month was 5.65 and in the third month it was 2.58. However, in the sixth month, with the 7 patients remaining in the protocol, it was 4.55. No significant differences were observed. The final average hematocrit concentration of the patients was 28.74 percent. The average hematocrit concentration, in the six-month evaluation that preceded the project, was 26.22 percent. Statistically-relevant differences were not observed in the 12 patients followed up for 3 months or in the 7 that concluded the study. No correlations between the levels of CRP and hematocrit concentration were observed. However, in our sampling, the mean basal CRP was not high and this might have been an important factor to explain the difference between our results and other published reports. Thus,...

Laboratorial validation of an automated assay for the determination of adenosine deaminase activity in pleural fluid and cerebrospinal fluid.

OBJECTIVE: The incidence of tuberculosis worldwide has emphasized the need for better assays designed to diagnose the disease, principally the extrapulmonary form. The objective of the present study was to validate the performance of an automated method for the determination of adenosine deaminase (ADA) activity in pleural fluid (PF) and cerebrospinal fluid (CSF), comparing it with a conventional method (the modified Giusti method). METHODS: In total, 134 samples were selected from among those tested in our laboratory: 94 PF samples and 40 CSF samples. The ADA activity was determined using the two methods. Inter- and intra-assay precision was determined, linear regression analysis was performed, simple concordance tests were conducted, and the means of the differences were calculated. RESULTS: The correlation coefficients for PF and CSF samples were, respectively, 0.96 and 0.95. Inter-assay precision was determined using 21 replicates at 3 different activity levels: low, medium and high. The percentage coefficient of variation (%CV) was, respectively, 5.9, 8.1 and 5.8 for PF samples, compared with 21.9, 18.6 and 13.8 for CSF samples. Intra-assay precision in %CV was 1.3 and 11.7, respectively, for PF and CSF samples. The concordance between the methods in PF and CRF samples was, respectively, 96.8% and 100%, considering the reference values for the diagnosis of TB to be 40 U/L (conventional) and 30 U/L (automated) in PF samples, versus 9 U/L (for both methods) in CSF samples. CONCLUSIONS: The results validate the use of the automated method of determining ADA activity in PF and CSF samples as an alternative to the conventional method.

Marcadores de ativação endotelial e auto-anticorpos na artrite reumatóide / Markers of endothelial activation and autoantibodies in rheumatoid arthritis

A artrite reumatóide (AR) é uma doença crônica inflamatória, caracterizada pela produção de auto-anticorpos e participação do endotélio vascular em sua patogênese. OBJETIVOS: Analisar a correlação da molécula de adesão intercelular (ICAM-1), o fator de von Willebrand (vWF), o fator reumatóide (FR) e o anticorpo antipeptídeo citrulinado cíclico (anti-CCP) com parâmetros de atividade clínica, laboratorial e alterações radiológicas da AR. MÉTODOS: Em 38 pacientes e 24 indivíduos que não apresentavam artrite reumatóide foram dosados FR, anti-CCP, vWF e ICAM-1 no soro. A atividade da doença foi definida pelo escore do DAS-28. O Health Assessment Questionnaire (HAQ) definiu a capacidade funcional, e os critérios revisados do American College of Rheumatology, a classe funcional. Radiografias de mãos e punhos quantificaram o índice de Sharp modificado. RESULTADOS: A idade dos pacientes foi de 52 ± 12,5 anos e dos indivíduos que não apresentavam artrite reumatóide, de 49 ± 9,4 anos. O tempo de doença foi de 68 ± 66,6 meses. O vWF apresentou correlação significativa com o tempo de evolução da doença. Os auto-anticorpos tiveram correlação significativa com o índice de Sharp. A correlação do vWF e a ICAM-1 foi significativa com o DAS-28, mas apenas o vWF se correlacionou com o HAQ e com índice de Sharp. CONCLUSÃO: Esse estudo demonstrou que os auto-anticorpos não estão correlacionados com a atividade da doença, mas com seu prognóstico e sua gravidade por meio da relação destes com o índice de Sharp. O vWF apresentou correlação significativa com os parâmetros de atividade e gravidade da doença.

Rheumatoid arthritis (RA) is an inflammatory chronic disease characterized by the production of antibodies and participation of the vascular endothelium in its pathogenesis. OBJECTIVES: to analyze the correlation of serum levels of the intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1), von Willebrand factor (vWF), Rheumatoid factor (RF), and anti-cyclic citrulinated peptide (anti-CCP) with clinical, laboratory, and radiological parameters of RA. METHODS: Serum levels of ICAM-1, vWF, RF, and anti-CCP were measured in 38 RA patients and 24 controls. Disease activity was measured by the DAS-28 score and functional capa-city was assessed using the HAQ score. The American College of Rheumatism criteria defined the functional class. Hand and fist X-rays were analyzed using the Sharp's score. Statistical analysis utilized the chi-square, Student's "t", Kolmogorov-Smirnov, and Mann-Whitney tests, as appropriate, as well as the Spearman's correlation coefficient. RESULTS: Age range was from 52 ± 12.5 and 49 ± 9.4 years-old in RA and controls, respectively. Disease duration range was 68 ± 66.6 months. Serum vWF levels had a positive significant correlation to disease evolution, whereas RF and anti-CCP correlated to the Sharp score. Serum vWF and ICAM-1 levels correlated to DAS-28, while only vWF correlated with HAQ and Sharp scores. CONCLUSION: This study shows that RF and anti-CCP autoantibody levels are correlated to disease prognosis rather than activity. Serum vWF levels are positively correlated to both activity and severity parameters of the disease.

Validação do sistema de transporte e das dosagens de amostras biológicas enviadas para a central de um laboratório de grande porte / Transport system validation and analysis of biological samples sent to a central laboratory

A monitoração de vários interferentes nos resultados das análises clínicas laboratoriais originados do sistema de transporte de amostras biológicas de um posto de coleta para o local da fase analítica propriamente dita é de extrema importância. Com o objetivo de avaliar a estabilidade dos bioanalitos durante o transporte, os autores, neste trabalho, monitoraram a temperatura das caixas térmicas. Através de dispositivos medidores de temperatura (chips) introduzidos no interior de cada caixa térmica, observou-se que elas permaneceram climatizadas em torno de 13º a 23ºC, simulando a temperatura ambiente por todo o percurso e tempo necessários. Compararam-se os resultados de análises clínicas laboratoriais das amostras biológicas sem transporte realizadas no laboratório de origem da coleta (Jundiaí) com os das mesmas amostras biológicas com transporte realizado na central em São Paulo. Inicialmente foram estudados os principais parâmetros bioquímicos e a coagulação do sangue, além da urinálise com bacteriologia. A análise estatística foi de concordância entre as duas médias através do coeficiente de correlação intraclasse e também pela técnica de Bland-Altman, na qual se observou que, entre os 29 analíticos estudados, 23 (79,3 por cento) apresentaram concordância boa a excelente; cinco (17,2 por cento), moderada a boa; e uma (3,5 por cento), fraca a moderada. Quanto às uroculturas, elas apresentaram 88 por cento de concordância, portanto boa a excelente, e a urina I apresentou 94 por cento de concordância na hematúria e 87,5 por cento na leucocitúria, também boa a excelente. Os dados obtidos pelas correlações dos resultados das amostras e dos gráficos de temperatura emitidos pelos dispositivos registradores representaram indicadores de validação do sistema de transporte e das análises laboratoriais em até 16 horas após coleta do material, simulando um posto muito distante.

The results obtained from biological sample analysis may be affected by several factors, among them, the conditions of samples transportation from the site of collection to the central laboratory.The aim of this paper was to verify the stability of the samples submitted to the transportation process (from Jundiaí to São Paulo) by comparing the results of 29 clinical laboratory parameters (including microbiology tests) on the same samples submitted or not to transportation. First, we verified the temperature inside a transportation box, during the routine the from Jundiaí to São Paulo, by introducing a special chip able to register it continuously. We observed that the temperature inside the box was kept between 13ºC and 23ºC (similar to room temperature). After that, samples were collected in Jundiaí and divided in two aliquots; one to be analysed at the laboratory in São Paulo. The methodology, apparatus and reagents used on the samples analysis were the same at both laboratories. The statistical analysis showed concordance between both averages trough correlation coefficient "intra-class" and by the "Blan-Altman methods". It was observed that among the 29 parameters: 23 (79,3 percent) showed good to excellent. On the data from urinalysis we observed a good to excellent concordance in the urocult (88.0 percent), and as well in the urine I analysis. The data obtained by the correlation between the laboratory results and the graphics of temperature registered by chip are strong indicative of validation of our laboratorial analysis and transportation system, up to 16 hours sample collection.

Homocisteína plasmática total e fator von Willebrand no diabete melito experimental / Total plasmatic homocysteine and von Willebrand factor in experimental diabetes mellitus

OBJETIVOS: Determinar os valores plasmáticos de homocisteína e fator von Willebrand, como marcador de disfunção endotelial, em ratos com diabete melito induzido por estreptozotocina. MÉTODOS: Trinta e cinco ratos (rattus norvegicus albinus), machos, adultos (180-200 g), randomizados em três grupos: controle (n=10) não receberam agente ou veículo; sham (n=10) receberam solução veículo da estreptozotocina; e diabético (n=15) receberam estreptozotocina. Após oito semanas de indução do diabete melito, os animais foram pesados, anestesiados e tiveram sangue colhido da aorta abdominal para determinação dos valores de homocisteína plasmática total, fator von Willebrand e glicemia. RESULTADOS: O modelo experimental foi reprodutível em 100 por cento dos animais. A média das concentrações plasmáticas de homocisteína foi: 7,9 æmol/l (controle); 8,6 æmol/l (sham) e 6,1 æmol/l (diabético), com diferença entre os grupos (p<0,01). Pelo método de comparações múltiplas entre os grupos, observou-se que os valores no grupo diabético foram menores que no sham (p<0,01). A média dos valores do fator von Willebrand foi 0,15 U/l (controle), 0,16 U/l (sham) e 0,18 U/l (diabético), com diferença entre os grupos (p=0,03). A média dos seus valores no grupo diabético foi maior que no grupo controle (p<0,05). No grupo diabético não houve correlação entre homocisteína e fator von Willebrand. CONCLUSÃO: No diabete melito induzido por estreptozotocina constataram-se valores reduzidos de homocisteína e elevados de fator von Willebrand, sem, contudo, haver correlações entre si e com níveis de glicemia final.

OBJECTIVES: To determine the plasma homocysteine and von Willebrand factor levels as markers of endothelial dysfunction in rats with diabetes mellitus induced by streptozotocin. METHODS: Thirty-five adult male rats (Rattus norvegicus albinus) (weight between 180-200g) were randomized into three groups: control group (n=10), which received no drugs or vehicles; sham group (n=10), which received streptozotocin solution; and diabetic group (n=15), which received streptozotocin. Eight weeks after diabetes mellitus induction, the animals were weighed and anesthesized; blood samples were collected from abdominal aorta for plasma total homocysteine, von Willebrand factor and glucose levels. RESULTS: The experimental model was reproducible in 100 percent of animals. The mean plasma homocysteine levels were: 7.9 æmol/l (control), 8.6æmol/l (sham) and 6.1æmol/l (diabetic), with difference among the groups (p<0.01). Multiple comparison analysis among the groups showed that values in the diabetic group were lower than in the sham group (p<0.01). The mean von Willebrand factor values were 0.15 U/l (control), 0.16U/l (sham) and 0.18 U/l (diabetic), with difference among the groups (p=0.03). The mean value was higher in the diabetic group than in the control group (p<0.05). Correlation between homocysteine and von Willebrand factor was not observed in the diabetic group. CONCLUSION: Reduced homocysteine levels and increased von Willebrand factor levels were observed in diabetes mellitus induced by streptozotocin; nevertheless, there were no correlations between them and with final glucose levels.

Detecção de anticorpos antinucleossomos em soros com diferentes padrões de imunofluorescência em células HEp2 / Detection of antinucleosome antibodies in sera with different patterns of immunofluorecence in HEp 2 cells

Objetivo: Este trabalho tem como objetivo a detecçãode anticorpos antinucleossomos em soros positivoscom diferentes padrões de fluorescência para anticorposantinucleares. Métodos: Até recentemente, não se dispunha de metodologia para a detecção destes anticorpos. Atravésda técnica de imunofl uorescência indireta (IFI) emcélulas HEp2 para a análise de fatores antinucleares(FAN) e ensaios de ELISA (ORGENTEC diagnostika GmbH, Mainz, Alemanha) para detecção de ANucls, realizou-se pesquisa em 61 soros obtidos na rotina de laboratório clínico. A detecção de anticorpos anti-DNAn foi realizado por IFI no tripanossomo Crithidia luciliae (DTS, Randburg, R.S.A) e anti-ENA por ELISA (Hemagen, São Paulo, Brasil). Resultados: Do total de soros pesquisados, 80,3 foram positivos e 19,7 negativos para o FAN, com diferentes padrões de fluorescência. Todos os FANs negativos não apresentaram ANucls. Das amostras positivas, 57 foram também positivas para ANucls. Com relação aos padrões de fluorescência o padrão homogêneo mostrou 91,6 de positividade, pontilhado grosso 91, pontilhado fi no denso 50, centromérico e nucleolar 0. A concomitância de ANucls e anti-DNAn ocorreu em 8 e anti-ENA com ANucls em 28,5. Conclusão: Pôde-se concluir que ANucls detectados em 57 dos casos de FAN positivo ocorreram de forma isolada ou concomitante com outros auto anticorpos antinucleares (DNAn e ENA). Finalmente, este trabalho demonstra que o conceito prático de que ANucls ocorre apenas com padrão homogêneo não corresponde à realidade

Doença de Castleman multicêntrica / Multicentric Castleman's disease

A doença de Castleman (DC) é uma rara desordem linfoproliferativa de origem desconhecida. É classificada histologicamente em três tipos: hialinovascular, o mais comum, células plasmocitárias e mista. O tipo hialinovascular é usualmente caracterizado por um curso benigno sem apresentar sintomas sistêmicos. Relataremos o raro caso de um paciente de 45 anos com doença de Castleman tipo hialinovascular com queixas de emagrecimento e fraqueza muscular de dois anos de evolução

Blockage of intracellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) in the prevention of reperfusion lesion in the skeletal musculature of EPM-1 Wistar rats

Objetivo: As lesões de isquemia-reperfusão (I/R) são uma forma de inflamação aguda na qual os leucócitos são considerados como tendo um papel fundamental. Este estudo foi feito com o objetivo de determinar se o bloqueio das Moléculas de Adesão Intercelular-1 (ICAM-1), envolvidas na diapedese dos leucócitos, é eficaz em minimizar estas lesões na musculatura esquelética dos membros posteriores de ratos. Métodos: A aorta infra-renal de três grupos de seis ratos adultos foi clampeada por seis horas. Logo após, um grupo foi sacrificado (grupo controle) e os outros foram submetidos a 24 horas de reperfusão, um com solução salina fisiológica 0,9 por cento (grupo reperfusão) e outro com anticorpos monoclonais anti-ICAM-1 (grupo ICAM-1). A quantificação da enzima mieloperoxidase foi utilizada para estimar o infiltrado de leucócitos na musculatura. Biópsias foram obtidas e coradas com hematoxilina-eosina e NADH. Amostras de sangue foram obtidas e parâmetros bioquímicos foram analisados (creatinina; potássio; DHL; leucograma; pH venoso, CK). Resultados: Os níveis de mieloperoxidase foram aumentados nos grupos reperfusão (p<0,001) e ICAM-1 (p<0,019) em relação ao grupo controle. A atividade oxidativa das fibras musculares foi aumentada de maneira significativa nos grupos submetidos a reperfusão. Os outros parâmetros não apresentaram diferenças significativas. Conclusões: A lesão de reperfusão foi de maior magnitude que a lesão isquêmica. Houve aumento da atividade oxidativa e do infiltrado inflamatório com a reperfusão, não se observando necrose significativa da musculatura com o microscópio óptico. O bloqueio de ICAM-I diminuiu o infiltrado inflamatório mas não o aumento da atividade oxidativa observado com a reperfusão.

Granulomatose de Wegener e mononeurite múltipla / Wegener granulomatosis and mononeuritis multiplex

A granulomatose de Wegeber (GW) é uma vasculite sistêmica de pequenos vasos que se caracteriza pela tríade clássica de sinusite, vasculite sistêmica e acometimento renal. Neste relato apresentamos um caso de granulomatose de Wegener em uma paciente de 48 anos com história pregressa de sinusite de longa data e estenose subglótica, que apresentou quadro de mononeurite múltipla e púrpura palpável.

Avaliaçäo dos métodos de identificaçäo do anticorpo anticitoplasma de neutrófilo (ANCA) / A critical evaluation of methods for the detection of anti-neutrophil cytoplasmatic antibodies (ANCA) subtypes

A literatura referente ao anticorpo anticitoplasma de neutrófilo (ANCA) chama atençäo para a grande importância deste no diagnóstico e monitoramento clínico de várias entidades que têm em comum um processo inflamatório do vaso, do rim e ou do pulmäo; entretanto, ainda se faz necessário uma análise crítica referente aos métodos utilizados para sua identificaçäo e caracterizaçäo. Neste estudo analisamos os três métodos mais utilizados na detecçäo e caracterizaçäo do ANCA, com objetivo de caracterizar o mais específico, sensível e econômico. Os métodos säo: imunofluorescência indireta (IFI), utilizando com substrato neutrófilos humanos, enzima imunoensaio (ELISA) para proteinase 3 (PR3) e "western blot", a partir de extrato semipurificado de neutrófilos humanos. Utilizamos o soro de 139 pacientes portadores de doenças autoimunes, infecciosas e vasculites e o soro de 10 indivíduos sadios que serviram de controle negativo. A concordância de resultados entre os três métodos utilizados permite concluir que a IFI representa um bom teste de triagem na detecçäo do ANCA, por tratar-se de um método mais econômico, entretanto menos específico. O ELISA e o "western blot" apresentaram-se mais específicos e sensíveis, porém de alto custo, sendo indicados quando a caracterizaçäo do ANCA fizer-se necessária.

II Consenso Brasileiro de fator antinuclear em células HEp-2. Definições para a padronização da pesquisa de auto-anticorpos contra constituintes do núcleo (FAN HEp-2), nucléolo, citoplasma e aparelho mitótico e suas associações clínicas / II Brazilian Consensus on antinuclear antibodies in HEp-2 cells. Definitions for standardization of autoantibody testing against the nucleus (ANA HEp-2), nucleolus, cytoplasm and mitotic apparatus, as wel as its clinical associations

Objetivo: O Segundo Consenso Brasileiro de Fator Antinuclear (FAN) em Células HEp-2 ratificou os algoritmos de decisão para leitura dos padrões do FAN na imunofluorescência indireta vistos na primeira edição do Consenso Brasileiro, adicionando ainda um novo algoritmo relacionado com os padrões mistos. Métodos: Tendo em vista a habilidade do teste em detectar auto-antígenos nos distintos compartimentos celulares, e não apenas no núcleo, propõe-se novas denominações para este exame laboratorial. Resultados e Conclusões: Como novas denominações algumas sugestões foram igualmente aceitas, dentro do tema "pesquisa de aut-anticorpos contra constituintes do núcleo (FAN HEp-2), nucléolo, citoplasma e aparelho mitótico". Foram abordadas as principais relevâncias clínicas com os padrões de FAN descritos, facilitando o melhor uso do ensaio pelo médico

Estudo do fator von Willebrand em pacientes com esclerose sistêmica / Evaluation of serum von Willebrand factor in systemic sclerosis

Objetivo: Avaliar o papel do fator de von Willebrand (vWf:Ag) como possível marcador sorológico de atividade ou gravidade na esclerodermia sistêmica. Métodos: Determinaçao do vWf:Ag pela técnica de ELISA em 26 portadores de esclerodermia sistêmica que preenchiam os critérios do Colégio Americano de Reumatologia e sua correlaçao com vários parâmetros clínicos e laboratoriais. Especial atençao foi dada a parâmetros de extensao (forma limitada x difusa, número de sistemas envolvidos) e gravidade (escore clínico de gravidade, velocidade de progressao) da doença. Foi utilizado grupo-controle com 46 indivíduos saos,doadores de sangue. A significância estatística foi determinada pelo teste do qui-quadrado ou pelo exato de Fisher. Resultados: O vWf:Ag estava significativamente aumentado nos pacientes esclerodérmicos, quando comparado a controles normais (p<0,01). Nao houve diferença estatisticamente significante entre pacientes em atividade quando comparados àqueles em remissao (p=0,07) ou quando comparamos: extensao (difusa x limitada, p=0,33) ou gravidade (grave x moderada, p=0,65) da doença. Também nao encontramos correlaçao entre aumento vWf:Ag e qualquer outra alteraçao clínica ou laboratorial, em especial as clássicas provas de atividade inflamatórias (p=0,62). Conclusoes: O aumento do vWf:Ag encontrado na ES parece se dever à lesao vascular presente nesta doença e nao a uma simples reaçao de fase aguda. O reduzido número de nossa amostra e a nao disponibilidade de gold standard confiável podem ser sido em parte responsáveis pela falha em estabelecer um papel marcador de atividade para o vWf:Ag. Mais estudos, com ampliaçao do número de casos, fazem-se necessários

Fator von Willebrand e de doenças reumáticas: marcador de lesao vascular ou reagente de fase aguda? / Von Willebrand factor and rheumatic diseases: marker of endothelial injury or acute phase protein?

Objetivo: Verificar o significado da dosagem plasmática do antígeno do fator von Willebrand (vWf:Ag) em doenças reumáticas como marcador de lesao vascular e como reagente de fase aguda. Material e métodos: Determinaçao do vWf:Ag, pela técnica de ELISA, em portadores de LES (31 pacientes) e AR (26 pacientes) e sua correlaçao com vários parâmetros clínicos e laboratoriais. Foi utilizado grupo-controle com 46 indivíduos saos, doadores de sangue. A significância estatística foi determinada pelo teste do qui quadrado ou pelo exato de Fisher. Resultados: Os títulos de vWf:Ag mostraram-se significantemente alterados apenas nos pacientes com LES em atividade (p<0,001). Nos pacientes com AR sem vasculopatia, nao houve aumento estatisticamente significante, mesmo naqueles em franca atividade. Nao houve correlaçao significante entre os títulos de vWf:Ag e outros parâmetros clínicos e laboratoriais, em especial com a velocidade de hemossedimentaçao (VHS). Conclusao: Os autores concluem que o vWf:Ag pode se constituir em marcador plasmático útil de lesao vascular e nao parece comportar-se como mero reagente da fase aguda

Activity of bristles from an Amazonian lepidoptera, "Premolis semirufa", on the human complement system

O lepidóptero Premolis semirufa habita os seringais da regiao Amazônica. Os seringueiros denominam pararama a forma larval do inseto e pararamose a doença ocupacional causada pelo contato acidental com cerdas da larva ou casulo durante a coleta do látex. Os sintomas imediatos que se seguem ao contato sao locais e consistem em prurido intenso, edema e dor, que sao geralmente transitórios e desaparecem em poucos dias. Entretanto, em algumas circunstâncias, o processo torna-se crônico, podendo evoluir para a deformidade e imobilizaçao da articulaçao afetada, lembrando, sob alguns aspectos, artrite reumatóide. O estudo da açao in vitro de cerdas e substâncias solúveis associadas sobre o sistema complemento humano mostrou que tanto cerdas quanto extrato salino inativam complemento total e o componente C2, geram C3d a partir de C3, sem afetar os níveis de Clq. Estes resultados sugerem que a via clássica de ativaçao do complemento nao está envolvida no processo. A inativaçao direta de C2 e a geraçao de C3d sao compatíveis com a presença de substâncias solúveis com açao lítica associadas às cerdas, embora nao tenha sido excluída ativaçao paralela da via alternativa como mecanismo de produçao de C3d